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    聚丙烯酰胺凝膠電泳ppt下載

    素材編號:
    337308
    素材授權:
    免費下載
    素材格式:
    .ppt
    素材上傳:
    chenshuyan
    上傳時間:
    2019-02-27
    素材大小:
    494.01 KB
    素材類別:
    醫療疾病課件PPT
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    聚丙烯酰胺凝膠電泳ppt

    聚丙烯酰胺凝膠電泳ppt免費下載是由PPT寶藏(www.ijjv.tw)會員chenshuyan上傳推薦的醫療疾病課件PPT, 更新時間為2019-02-27,素材編號337308。

    這是聚丙烯酰胺凝膠電泳ppt,包括了基本原理,醋酸纖維薄膜電泳(CAME),聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE),SDS-PAGE電泳瓊脂糖凝膠電泳,等電聚焦電泳,雙向電泳等內容,歡迎點擊下載。

    電泳技術 (electrophoresis)
    本章主要內容
    基本原理
    醋酸纖維薄膜電泳(CAME)
    聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)
    SDS-PAGE電泳
    瓊脂糖凝膠電泳
    等電聚焦電泳
    雙向電泳
    概      念
    帶電粒子在直流電場中的作用下,在一定介質(溶劑)中發生的向異性電極定向移動的現象稱為“電泳”
    利用電泳現象對混合物進行分離分析的技術稱為“電泳技術”
    分       類
    按有無支持物分為:自由電泳,區帶電泳(其中根據支持物的不同而有不同的名稱如紙電泳,瓊脂糖電泳等)
    按電壓分:低壓電泳,高壓電泳
    按用途分:分析電泳,制備電泳,定量免疫電泳
    按支持物形狀分:薄層電泳,平板電泳,圓盤電泳,毛細管電泳
    按區帶形式分:盤狀電泳,火箭電泳
    特      點
    凡是帶電物質均可應用某一電泳技術分離,并可進行定性定量分析
    樣品用量少
    設備簡單
    可在常溫進行
    操作簡便省時
    分辨率高
    蛋白質電荷的來源
    電泳的基本原理
    帶電粒子在電場中所受的力F=QE
    所受阻力F’=6πrηv
    電泳平衡時F=F’,則QE= 6πrηv
    遷移率(電泳淌度)=Q/ 6πrη,表示粒子在單位電場強度下的泳動速度
    不同物質能否利用電泳進行分離,決定于兩者遷移率的差別,有差別才能分離。電泳后分開的距離與遷移率、電壓、時間等相關
    影響電泳的因素
    樣品的性質
    電場強度
    緩沖液:
                 (1)pH值
                 (2) 成分
                 (3)離子強度
    支持介質:吸附、電滲,分子篩
    溫度
    電     滲 (electro-osmosis)
    在電場作用下液體相對于固體表面的移動稱“電滲”
    醋酸纖維薄膜電泳 (cellulose  acetate membrane electrophoresis, CAME)
    醋酸纖維素是纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯
    對蛋白質樣本吸附少,分離速度快,時間短,電滲作用雖然高但很均一,不影響分離效果,經透明化處理后有利于光吸收掃描測定和膜的長期保存
    影響因素:膜的性質,緩沖液,電流和電壓,電泳時間和溫度,電泳槽的密封性能
    聚丙烯酰胺凝膠電泳 (polyacryamide gel electrophoresis, PAGE)
     聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide, Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide, Bis)在加速劑(TEMED)和催化劑(硫酸銨)的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠
    聚丙烯酰胺凝膠的聚合反應
    聚丙烯酰胺凝膠
    特點:(1)在一定濃度時,凝膠透明、有彈性、機械性能好  (2)化學性能穩定,與被分離物不起化學反應   (3)對pH和溫度變化較穩定  (4)幾乎無電滲作用 ,只要Acr純度高,操作條件一致,則重復性好 (5)樣品不易擴散且用量少  (6)凝膠孔徑可調節  (7)分辨率高
    凝膠聚合的影響因素
    空氣中氧能淬滅自由基,使聚合反應終止,故聚合過程中反應液應與空氣隔絕
    某些材料如有機玻璃等能抑制聚合反應
    某些化學藥物如赤血鹽等可減慢反應速度
    溫度升高聚合加快,溫度降低聚合減慢
    聚丙烯酰胺凝膠的性質
    總濃度T%:100ml凝膠中含有Acr和Bis的總克數
    T%越大,平均孔徑越小,凝膠機械強度增加。但達15%時膠脆性增大,易斷裂;T%過小則凝膠稀軟不易操作
    交聯度C%:交聯劑Bis占單體Acr與Bis總量的百分數
    T%值固定時,C%=5%時孔徑最小,高于或低于5%時孔徑相應變大。C%過大膠不透明,缺乏彈性;過小則凝膠呈糊狀
    分子量范圍與凝膠濃度的關系
    PAGE的分類
    根據具體操作分為:圓柱型,平板型(水平方向、垂直方向)
    根據凝膠系統的均勻性分為:連續系統,不連續系統
    PAGE圓盤電泳示意圖
    不連續圓盤電泳示意圖
    不連續電泳的物理效應
    樣品濃縮效應:凝膠孔徑不連續
                                緩沖液離子成分不連續
                                pH的不連續性
    分子篩效應
    電荷效應
       各種蛋白質因所帶的凈電荷、分子量大小和形狀不同而得以分離
    PAGE常見問題
    凝膠不聚合或聚合時間過長:最常見原因是硫酸銨失效,需新鮮配制;室溫較低時聚合變慢,可調整硫酸銨和TEMED用量
    指示劑向相反方向移動:電源連接錯誤,緩沖液選擇錯誤
    指示劑前沿呈“曲線”:“微笑”現象由凝膠冷卻不均勻造成;“皺眉”現象多由電泳裝置不合適、底部氣泡或靠近玻片的凝膠聚合不完全引起
    SDS-PAGE
    SDS:十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate),陰離子去垢劑
    SDS帶有大量負電荷,大大超過天然蛋白質原有的電荷量,從而消除或掩蓋了不同種類蛋白質間的電荷差異
    SDS作為變性劑和助溶劑,能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白質分子的二級和三級結構
    SDS-蛋白質的遷移率取決于分子量的大小
    SDS-蛋白質復合物的形狀
    瓊脂糖凝膠電泳
    瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的鏈狀多糖
    優點:(1)含液體量大,達98%~99%,近似自由電泳,但樣品擴散速度小,對蛋白質吸附極少  (2)分辨率高,重復性好 (3)電泳速度快 (4)透明,不吸收紫外線,可直接用紫外檢測儀測定 (5)區帶可染色,樣品易回收
    缺點:含有較多硫酸根,電滲作用大
    用途:用于核酸的分離、鑒定
    等電聚焦電泳 (isoelectric focusing electrophoresis, IEFE)
    利用具有線性pH梯度的電泳介質來分離等電點不同的蛋白質
    當蛋白質遷移至其pI相同的pH處,則不再泳動,而濃縮成狹窄的區帶
    蛋白質因其等電點的不同而得以分離
    pH梯度的形成
    IEFE的聚焦效應
    常規PAGE與SDS-PAGE的區別
    IEFE優缺點
    優點:(1)分辨率高,可將pI相差0.01~0.02pH單位的蛋白質分開 (2)區帶狹窄 (3)樣品不管加到什么部位都可聚焦到其等電點
    缺點:(1)需用無鹽溶液,而無鹽溶液中蛋白質易沉淀  (2)不適于在pI點不溶解或發生變性的蛋白質
    雙向電泳
    又稱二維凝膠電泳
    第一相為IEFE,根據蛋白質電荷差異進行分離
    第二相為SDS-PAGE,根據蛋白質分子量差異進行分離
    分辨率極高,是蛋白質組研究的關鍵開門技術
    轉移電泳
    其它電泳技術
    脈沖場凝膠電泳
    毛細管電泳
    等等
    完!
     

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    免疫固定電泳ppt:這是免疫固定電泳ppt,包括了什么是電泳技術,沉淀反應,單向擴散試驗,判斷抗原或抗體的存在以及估計相對含量,判斷分析物的分子量,免疫電泳技術,區帶電泳,對流免疫技術,火箭免疫電泳,免疫電泳,免疫固定電泳,免疫交叉電泳等內容,歡迎點擊下載。

    聚丙烯酰胺凝膠電泳ppt

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